养细胞的时候，常有人想知道细胞到底有没有在长、长得快不快。其实，细胞增殖检测是实验的核心，如果方法选对了，效率能翻倍，还能避免很多无效劳动。富衡生物给大家整理了一些常见的检测手段，无论是新手还是老手都能用。咱们先从简单的讲起。 第一类叫直接计数法，就是直接数细胞数量。这个方法简单直观，适合刚入门的人。常见的工具有血球计数板和自动化细胞计数仪。血球计数板便宜操作也简单，有个显微镜就能用了，就是手工数误差有点大，还得靠台盼蓝来区分死活细胞。自动化细胞计数仪效率高数据准，能自动分死活细胞，就是买这个和用这个都得花钱。这种方法适合预实验或者样本量少预算有限的实验。 第二类是代谢活性检测法，这个是实验室的首选。主要是通过看细胞代谢得有多旺盛来判断增殖情况。线粒体酶活跃或者ATP含量高的话，说明细胞增殖得好。最经典的就是MTT法了，黄色的MTT被活细胞里的线粒体脱氢酶还原成紫色的甲臜，然后用酶标仪测吸光度就行。这方法便宜好操作，缺点就是需要用DMSO溶解结晶，试剂对细胞有点损伤。CCK-8法是MTT的升级版，用WST-8代替了MTT，产物能溶于水不用再溶解了，三步就能搞定。这个方法兼容96孔板适合高通量检测。不过它的成本稍微比MTT高一点。小贴士：做药物筛选的时候可以设三个复孔预防误差边缘的孔放点PBS防蒸发孵育1到4小时后测450nm的OD值就行了。还有一种是ATP含量检测法ATP浓度跟活细胞数量成正比荧光素酶催化反应发光亮的话说明增殖得好这个灵敏度很高适合微量样本和高通量筛选不过成本最高还要注意药物影响线粒体可能导致假阳性得验证一下才行。 第三类是精准级的直接检测DNA合成方法这个结果最有说服力。³H-胸苷掺入法以前用得很多但现在很少用了因为它是放射性的操作复杂还危害环境现在最常用的是BrdU/EdU法这两种都是人工合成的胸腺嘧啶类似物在DNA复制的时候掺进去成为非放射性的替代品。EdU-555细胞增殖检测试剂盒就是专门用这种原理设计的可以搭配FACS或FM来用特别适合做细胞周期或增殖机制这类精细实验。 总的来说养细胞的时候别光顾着高兴或者急着交差多学点这些检测手段帮你搞定细胞增殖问题事半功倍！