我要给你讲一个无内毒素质粒大提的超快速全流程速查手册。为了确保成功，首先把所有需要的仪器和试剂都准备好。拿个超微量分光光度计，提前校零一下，这样读数才能准。离心机的话，选一个转速稳定在8000转的，也就是8228倍重力加速度。还有可调式移液器，50到100微升还有100到1000微升的各一支，都得备齐吸头盒。试剂盒的话，天根的无内毒素质粒大提试剂盒是不错的选择。还要准备异丙醇，这个用来沉淀DNA。另外准备好50毫升的离心管，提前编好号，避免混错了。 接下来讲操作步骤。这个过程分为12步，把每一步都稳住才能拿到高纯度的质粒。 第一步是平衡吸附柱。把平衡液BL加入吸附柱CP6里面，再放到50毫升的收集管中。然后以8000转的速度离心两分钟。倒掉废液后立刻使用吸附柱，别让它在那儿放太久，会影响结合能力的。 第二步处理菌液的时候一定要小心别过滤太猛了。把过夜培养好的菌液分批次倒入过滤杯中，每批别超过吸附柱最大容积15毫升。如果离心机转子倾角大一些的话，建议每次别超过10毫升，防止漏液出来。加入0.7倍滤液体积的异丙醇（记得别加太多了），然后上下晃动几下混匀后转移到吸附柱里面。 第三步就是离心收集了。室温下以8000转离心两分钟倒出废液后把柱子重新套回收集管中。因为可能有滤液损耗，所以最好分两次过柱，每次都按照上面说的条件来做。 第四步漂洗Ⅰ时一定要给漂洗液PW里加足够的无水乙醇。加入10毫升漂洗液后以8000转离心两分钟倒掉废液后套回柱子里。 第五步漂洗Ⅱ要重复一下上一步的操作。这样双次漂洗可以彻底去除盐离子和残留蛋白。 第六步是高浓度乙醇洗涤这个步骤千万别心疼钱哦！给吸附柱里面加入3毫升无水乙醇后以8000转离心两分钟倒出废液再套回柱子里。 第七步是彻底甩干残留乙醇给后续操作避免隐患。以8000转再离心五分钟把乙醇完全挥发掉然后盖上盖子放一会儿晾干然后再接着做后续步骤吧！ 第八步就是洗脱环节了一定要注意pH值！把吸附柱放进干净的50毫升收集管中滴加1到2毫升TB洗脱缓冲液到膜中间悬空处静置五分钟后再以8000转离心两分钟收集液移到1.5毫升EP管里放入-20度冰箱保存即可。如果要用ddH2O做洗脱液的话一定要把pH值调到7.5到8.0之间低于7的话回收率会显著降低哦！ 最后总结一下这次流程吧：现用现加平衡液可以保持吸附柱活性不流失；异丙醇量宁少勿多这样RNA就不会跑来捣乱；双次漂洗加上高浓度乙醇甩干可以去除盐离子、蛋白还有残留乙醇这样下游酶切和PCR就不会受干扰了。 只要按照这个流程来做你就会发现质粒浓度大于等于5微克每毫升、A260/A280比值大于等于1.8这些数据不再是靠运气得来的而是实验的常规了！